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PCR反應出現非特異性擴增原因及對策
日期：2022-11-24 14:15
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摘要：PCR反應出現非特異性擴增原因及對策
PCR擴增后出現的條帶與預計的大小不一致，或大或小，或者同時出現特異性擴增帶與非特異性擴增帶。
1、 引物與靶序列不完全互補或引物聚合形成二聚體。
2、 Mg2+離子濃度過高。
3、 退火溫度過低。
4、 PCR循環次數 過多有關。
5、 酶的質和量，往往一些來源的酶易出現非特異條帶而另一來源的酶則不出現，酶量過多有時也會出現非特異性擴增。
其對策有：必要時重新設計引 物。減低酶量或調換另一來源的酶。降低引物量，適當增加模板量，減少循環次 數。適當提高退火溫度或采用二溫度點法（93℃變性，65℃左右退火與延伸）。