PCR 與RT—PCR的概念及原理

聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的*大特點是能將微量的DNA大幅增加。PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。

RT—PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。

原理是提取組織或細胞中的總RNA或者mRNA，在反轉錄酶的作用下將RNA或者mRNA反轉錄成cDNA，再以該cDNA**鏈為模板進行PCR擴增，根據靶基因設計用于PCR擴增的基因特異的上下游引物，基因特異的上游引物與cDNA*1鏈退火，在Taq DNA聚合酶作用下合成cDNA第2鏈。再以cDNA**鏈和第2鏈為模板，用基因特異的上下游引物PCR擴增獲得大量的cDNA。

Real-time PCR（實時熒光定量PCR）也可以縮寫為RT—PCR，此外還有一個qPCR（Quantitative Rea-ltime-PCR ），有人可能將這三者搞混。

其實Rea-ltime-PCR和 qPCR（Quantitative Rea-ltime-PCR ）都是指實時定量PCR，即在PCR進行的同時，對其過程進行實時監測，可以對起始模板數量進行**的分析。并且國際上的約定俗成的是：RT-PCR特指反轉錄PCR，而Real-time PCR一般縮寫為 qPCR（quantitative real-time PCR）。

RT-PCR的方法已經廣泛應用于RNA的構造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領域。