PCR工作步驟

需要自備的器材：

1．方法儀器：分析天平、離心機、熒光PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器（2 μL、20

μL、200 μL、1000 μL）。

2．耗材：熒光PCR 專用反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯（DEPC）水

處理的mie菌離心管、吸頭（10 μL、200 μL、1000 μL）、mie菌雙蒸水。

樣本采集、存放及運輸：

1、樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；

2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（zui多凍融3次）；

3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。

工作步驟:

標準的PCR過程分為三步：

1. DNA變性（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA

2. 退火（復性）（40℃-65℃）：系統溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。                                                  

3. 延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右*佳的活性）的作用下，以dNTP為原料，從引物的5′端→3′ 端延伸，合成與模板互補的DNA鏈。

每一循環經過變性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。 

現在有些PCR因為擴增區很短，即使Taq酶活性不是*佳也能在很短的時間內復制完成，因此可以改為兩步法，即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行，以減少一次升降溫過程，提高了反應速度